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酶聯(lián)免疫技術(shù)講座之試劑盒的五大重要點

更新時間:2014-11-26 點擊量:1181

    已經(jīng)普遍到數(shù)大學(xué)實驗室的酶聯(lián)免疫技術(shù),有著重復(fù)性穩(wěn)定及吸附性能好等特點。今天上海恒遠給大家?guī)砹讼嚓P(guān)實驗講座,酶聯(lián)免疫試劑盒的五大重要點分析。
1. 靈敏度的要求
    根據(jù)我公司技術(shù)人員的分析:如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較高,則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較低,則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準確的,低于這個值因為與曲線是個“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān),所以結(jié)果是有偏差的,是一種估算。再加上實驗誤差,所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時,應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值,而不是試劑盒上
寫的靈敏度。
2. 標本復(fù)查
    ELISA手工檢測過程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法,可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結(jié)果進行復(fù)查。
3. 灰區(qū)的設(shè)置
    通常情況下,ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。

    
4. 測試過程請注意:
   ① 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
   ② 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。
   ③ 實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
   ④ 酶標包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5. 常用的表示結(jié)果方法
   ① 定性測定
   ② 半定量測定,結(jié)果一般以滴度表示。
   ③ 定量測定,即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標準曲線。